CARA MEMBUAT SUSPENSI SEL DARAH MERAH 5 % DAN CARA MENCUCINYA

CARA MEMBUAT SUSPENSI SEL DARAH MERAH 5 % DAN CARA MENCUCINYA

A.      Tujuan

1.       Pembuatan suspensi eritrosit 5%

Suspense eritrosit yangterlalu tinggi atau terlalu rendah dapat mempengaruhi drajat Ab yang menyelimuti eritrosit. Dengan meningkatkan ratio serum terhadap sel dapat mendeteksi Ab yang bereaksi lemah yang tidak terdeteksi dibawah suspensi normal eritrosit

2.       Cara mencuci eritrosit

Untuk menghilangkan globulin bebas yang terdapat dalam suspensi eritrosit. Karena globulin yang bebas akan menetralisir AHG yang dapat menyebabkan negative falsu

B.      Alat dan bahan

1.       sel darah merah

2.       salin

3.       sentrifuge

4.       tabung reaksi

5.       mikropipet

6.       tip biru dan tip kuning

7.       rak tabung

C.      Cara kerja

1.       Pembuatan suspensi eritrosit 5%

a.       Siapkan alat dan bahan

b.      Ke dalam tabung reaksi masukkan 1000  ul saline

c.       Buang 50 ul salit tersebut kemudian

d.      Tambahkan 50 ul sel eritrosit

e.      Homegenkan suspense tersebut.

2.       Cara mencuci eritrosit

a.       Siapkan alat dan bahan

b.      Suspensi eritrosit yang sudah dibuat di centrifuge kecepatan 1000 rpm selama 1 menit

c.       Buang supernatant

d.      Kedalam endapan eritrosit tambahkan 1 ml salin dan putar kembali dengan kecepatan 1000 rpm selama 1 menit

e.      Ulangi langkah d sebanyak 3-4 kali.

f.   Kepada endapan eritrosit terakhir ditambahkan 950 ul salin sehingga didaptkan suspense eritrosit 5% lagi.

CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVE)

.   
    
 

CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVE

mediondiagnostics.us

diamed.co.il

I.                    TITRASI ANTI RHESUS (ANTI-D)

Anti D yang digunakan adalah anti-D IgG (monoclonal) yang hanya bersifat antibody inkomplit dan memiliki titer IgG yang cukup tinggi untuk mengetahui tite inkomplit anti-D dan mendapatkan CCC yang ideal. Terhadap anti-D ini harus dilakukan titrasi dengan cara Double diluent ( pengenceran berganda/serial) untuk selanjutnya dapat dipastikan nilai pengenceran anti-D 9reaksi 2+) yang akan 

digunakan dalam pembuatan CCC.

A.      Peralatan

SUMBER FOTO: beckmancoulter.com

1.       Incubator ( waterbath) suhu 37 ⁰ C

2.       Centrifuge

3.       Mikroskop

4.       Timer
5.    Rak tabung

6.       Tabung reaksi ukuran 12 x 75 mm

7.       Pipet tetes

8.       Botol semprot

9.       Slide tes

10.   Beaker glass

11.   Wadah limbah

B.      Reagensia

1.     Sel golongan darah O rhesus positif  normal 2-5 %

2.      Anti-D IgG

3.      Saline

4.     Coomb’s serum (AHG)

C.      Teknik pengenceran berganda

1.       Pengenceran dilakukan di dalam 1o tabung secara berurutan

2.       Kedalam masing-masing tabung di tambahkan 2 tetes salin

3.       Pada tabung pertama tambahkan 2 tetes Anti-D IgG dengan menggunakan pipet yang sama .Kocok kuat-kuat, hindari terbentuknya gelombung udara

4. Diambil 2 tetes dari tabung pertama lalu pidahkan pada tabung kedua, kocok-kocok.dilakukan hal yang sama pada tabung selanjutnya dimana pada tabung terahir  dibuang 2 tetes hasil pengencerannya

5.     Kepada masing-masing tabung tambahkan sel O rhesus positif 5%, dan dikocok dengan baik

6.   Inkubasi seluruh tabung pada suhu 37 ⁰ C selama 30 menit ( pada tahap ini anti-D Coated dengan antigen D).

7.    Cuci seluruh tabung sebanyak 3x dengan saline. Pada pencucian trakhir supernatant dibuang sampai bersih

8.  Kepada endapan (sedimen eritrosit), masing-masing tambahkan 2 tetes Coomb’s serum kemudian dikocok dengan kuat-kuat.

9.       Putar semua tabung pada kecepatan 2000 rpm selama 20 detik

10.   Baca hasil reaksinya secara makroskopik dan catat gradasi aglutinasinya.

D.      Contoh hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG	2	4	8	16	32	64	128	256	512	1024
Titer Antibody Inkomplit	4+	4+	4+	4+	3+s	3+	2+s	2+	1+	-

E.       Hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG	2	4	8	16	32	64	128	256	512	1024
Titer Antibody Inkomplit	3+	3+	3+	2+	2+	1+	1+	1+	-	-

F.       Kesimpulan

1.    Titer inkomplit Anti-D IGG adalah 512 ( CONTOH TITRASI)

2.   Pengenceran anti-D IgG yang akan digunakan untuk pembuatan reagensia CCC adalah 1/128 ( PADA CONTOH TITRASI) berdasarkan percobaan titrasi anti-D IgG di atas, maka untuk mendapatkan hasil pembuatan CCC yang baik (reaksi oftimal 2+), anti-D tersebut harus diencerkan terlebih dahulu hingga 128 kali

II.                  TEKNIK PEMBUATAN CCC ( proses pelapisan sel O ( sensitisasi ) = coated)

1.   Ke dalam sebuah tabung, masukkan 1 tetes anti-D igG, selanjutnya tambahkan 127 tetes salin( pengenceran 1/128)

2.    Kemudian tambahkan sel olongan O rhesus Positif 5 % sebanyak 64 tetes kocok dengan baik-baik

3.       Inkubasi pada suhu 37⁰ C selama 30 menit

4.       Cuci dengan saline s3-4 kali

5.       Sedimen sel disuspensikan kembali menjadi 5 % dalam saline = CCC

6.      Sebelum CCC digunakan , baiknya diuji terlebih dahulu dengan Coomb’s serum dengan cara 1 tetes CCC + 2 tetes Coomb’s serum maka akan terbentuk reaksi aglutinasi minimal 2+