CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVE)

.   
    
 

CARA PEMBUATAN CCC (COOMB’S CONTROL CEL POSITIVE

mediondiagnostics.us

diamed.co.il

I.                    TITRASI ANTI RHESUS (ANTI-D)

Anti D yang digunakan adalah anti-D IgG (monoclonal) yang hanya bersifat antibody inkomplit dan memiliki titer IgG yang cukup tinggi untuk mengetahui tite inkomplit anti-D dan mendapatkan CCC yang ideal. Terhadap anti-D ini harus dilakukan titrasi dengan cara Double diluent ( pengenceran berganda/serial) untuk selanjutnya dapat dipastikan nilai pengenceran anti-D 9reaksi 2+) yang akan 

digunakan dalam pembuatan CCC.

A.      Peralatan

SUMBER FOTO: beckmancoulter.com

1.       Incubator ( waterbath) suhu 37 ⁰ C

2.       Centrifuge

3.       Mikroskop

4.       Timer
5.    Rak tabung

6.       Tabung reaksi ukuran 12 x 75 mm

7.       Pipet tetes

8.       Botol semprot

9.       Slide tes

10.   Beaker glass

11.   Wadah limbah

B.      Reagensia

1.     Sel golongan darah O rhesus positif  normal 2-5 %

2.      Anti-D IgG

3.      Saline

4.     Coomb’s serum (AHG)

C.      Teknik pengenceran berganda

1.       Pengenceran dilakukan di dalam 1o tabung secara berurutan

2.       Kedalam masing-masing tabung di tambahkan 2 tetes salin

3.       Pada tabung pertama tambahkan 2 tetes Anti-D IgG dengan menggunakan pipet yang sama .Kocok kuat-kuat, hindari terbentuknya gelombung udara

4. Diambil 2 tetes dari tabung pertama lalu pidahkan pada tabung kedua, kocok-kocok.dilakukan hal yang sama pada tabung selanjutnya dimana pada tabung terahir  dibuang 2 tetes hasil pengencerannya

5.     Kepada masing-masing tabung tambahkan sel O rhesus positif 5%, dan dikocok dengan baik

6.   Inkubasi seluruh tabung pada suhu 37 ⁰ C selama 30 menit ( pada tahap ini anti-D Coated dengan antigen D).

7.    Cuci seluruh tabung sebanyak 3x dengan saline. Pada pencucian trakhir supernatant dibuang sampai bersih

8.  Kepada endapan (sedimen eritrosit), masing-masing tambahkan 2 tetes Coomb’s serum kemudian dikocok dengan kuat-kuat.

9.       Putar semua tabung pada kecepatan 2000 rpm selama 20 detik

10.   Baca hasil reaksinya secara makroskopik dan catat gradasi aglutinasinya.

D.      Contoh hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG	2	4	8	16	32	64	128	256	512	1024
Titer Antibody Inkomplit	4+	4+	4+	4+	3+s	3+	2+s	2+	1+	-

E.       Hasil titrasi

Double diluen Anti-D IgG	2	4	8	16	32	64	128	256	512	1024
Titer Antibody Inkomplit	3+	3+	3+	2+	2+	1+	1+	1+	-	-

F.       Kesimpulan

1.    Titer inkomplit Anti-D IGG adalah 512 ( CONTOH TITRASI)

2.   Pengenceran anti-D IgG yang akan digunakan untuk pembuatan reagensia CCC adalah 1/128 ( PADA CONTOH TITRASI) berdasarkan percobaan titrasi anti-D IgG di atas, maka untuk mendapatkan hasil pembuatan CCC yang baik (reaksi oftimal 2+), anti-D tersebut harus diencerkan terlebih dahulu hingga 128 kali

II.                  TEKNIK PEMBUATAN CCC ( proses pelapisan sel O ( sensitisasi ) = coated)

1.   Ke dalam sebuah tabung, masukkan 1 tetes anti-D igG, selanjutnya tambahkan 127 tetes salin( pengenceran 1/128)

2.    Kemudian tambahkan sel olongan O rhesus Positif 5 % sebanyak 64 tetes kocok dengan baik-baik

3.       Inkubasi pada suhu 37⁰ C selama 30 menit

4.       Cuci dengan saline s3-4 kali

5.       Sedimen sel disuspensikan kembali menjadi 5 % dalam saline = CCC

6.      Sebelum CCC digunakan , baiknya diuji terlebih dahulu dengan Coomb’s serum dengan cara 1 tetes CCC + 2 tetes Coomb’s serum maka akan terbentuk reaksi aglutinasi minimal 2+